Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

如何 - 在家中从胎盘中分离羊膜干细胞

Attila在家里写了一篇关于从胎盘分离羊膜干细胞的方法 - 这应该产生很多对话......检查出来,完整的步骤并讨论!

“胎盘是一种非常有价值的人体组织,虽然它的适当回收不是放置食欲,而是将干细胞从其羊膜层中分离出来,然后将它们储存起来用于整个家庭的后续再生目的。来自胎盘的人羊膜上皮细胞(HAEC)是人胚胎干细胞的替代替代物,并且具有在体外分化成所有三个胚层的潜力。这些细胞非常接近早期和广泛多能的羊水来源的干细胞,最近在网上引起了很大的关注,由De Coppi,Atala等人发表。在自然生物技术。在这里,我想表明,虽然我没有提供任何保证,也不能给予任何保证,但从胎盘中分离干细胞并不比制作牛排困难,并且在准备,投资和计时方面你甚至可以做到这一点。在家或在租金实验室。这个过程在道德上没有争议,因为胎盘通常在出生后丢弃。今天,干细胞疗法只是一种很有前途的可能性,但在不久的将来,自我意识的公民可以管理自己的干细胞,在车库里种植它们,然后将它们存放在冰箱里。如果是这样,它可能是一种自主医疗自我保险。我们正处于开源科学支持的生物运动的曙光之中,为人民服务。使用Make Backyard Biology问题,因为它发明了bioDIY或家庭或车库生物技术的基本语言。以下是卡通片中的算法,下面是详细的,但不是自我包含的文本协议。如果被问到,将在稍后提供更多细节。“

跳转后的其余图像和信息......链接到全尺寸图像 - 这里。

1. Googlise人羊膜干细胞和干细胞治疗的潜力。这不是事实,而是有希望的可能性。

2.咨询一些专家关于整个领域(如果你是自信的话,你可以跳过这一步)。

3.在出生前几个月与怀孕的家庭成员(或您的熟人)交谈,并说服她将羊膜细胞储存在家中。

4.出生前几个月咨询她的妇科医生,并说服他将出生时的胎盘放入装满冰块的无菌烧瓶中。为了不育,你可以用一些抗生素(青霉素 - 链霉素)将它加入磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS,这里的制备)中。

5.技术准备(我没有计算确切的金额,这是冒险所需要的,但它大约是数千美元,这可能比通过商业方式收集细胞便宜):设置无菌罩在你的车库。您可以在家用空气净化器中制作一个,参见Philip Ross的Home Mycology Lab,在Make Backyard Biology问题,第102页。租用或购买普通光学显微镜(10倍分辨率就足够了),离心机(1000rpm) ,买一个液氮冰箱。

6.当胎盘在手中时,请在4小时内处理。使用无菌手套。

7.将带有胎盘的烧瓶放在无菌罩下。取一个无菌剪刀,小心地切掉外面的上皮层。你切的越多,你获得的干细胞就越多。将羊膜层从绒毛膜上机械剥离。

8.将磷酸盐缓冲盐水溶液(PBS,此处制备)中的羊膜洗涤数次(8-10次)以除去血液。

9.用无菌剪刀彻底擦拭组织。

10.要释放羊膜上皮细胞,将切碎的羊膜与胰蛋白酶(0.05%)在37°C下孵育10分钟。 10分钟后从胰蛋白酶中取出消化的组织,并从消化中丢弃细胞以排除碎片。有不同种类的胰蛋白酶消化方案,我在这里遵循Miki等人。

11.在另一管胰蛋白酶(0.05%)中将剩余组织在37°C下处理20分钟(如果需要,再次执行此步骤以收集更多细胞)。

12.从第二(和第三个20分钟)消化物中汇集细胞。

13.通过100μm细胞过滤器传递细胞悬液。

14.在室温下以1200RPM(150-200g)将过滤的细胞悬浮液固化8分钟。

15.用PBS洗涤细胞沉淀并再次使用。

16.用血细胞计数器计数细胞,建议通过排除台盼蓝染料来确定细胞的活力,这是基于活细胞具有排除某些染料的完整细胞膜的原理,例如台盼蓝,而死细胞没有。从一个上皮细胞中,您可以获得多达1000万至6000万个干细胞。

17.准备冷冻培养基。冷冻方案来自最佳实验室手册,Kathy Barker的实验室导航仪:1ml /等分试样加10%。冷冻培养基通常含有常规培养基,10-20%血清和5-10%甘油或DMSO。

18.每个安瓿将在1ml培养基中取1×10(7)个细胞(或4×10(6)和2×10(7)个细胞之间)。

19.通过轻轻移液将沉淀重悬于冷冻培养基中。

20.为了逐渐冷冻细胞,安全地将安瓿放在-60°C或更低的温度下,并在那里放置16-24小时。

21.将等分试样与细胞一起放入液氮中并储存。正如查尔斯普拉特在低温生命和死亡中所说的那样(第56页):“液氮在大多数城市地区都可用(寻找”液态气体“),而且通常价格低廉。它是无毒的,但必须小心处理,因为它的温度为-196°C会对任何暴露的人体组织造成严重伤害。始终戴着厚重的手套和护目镜。“

22.在X年后需要修复时,将冻结的细胞交给医生。

好:冷冻

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