Jeffrey Cross
Jeffrey Cross

便宜的DIY GFP(绿色荧光蛋白)照明器

让我阅读The Worm Breeder's Gazette并不是令人毛骨悚然的疯狂。相反,它正在与凯瑟琳·赫奇斯(Kathryn Hedges)交谈 - 一个聪明,充满激情,知识渊博的科学家和艺术家 - 关于 公报的 有关制作GFP发光器的技巧便宜。 GFP或绿色荧光蛋白是分子生物学和神经科学中常用的荧光标记物。

在Humbolt州立大学的硕士课程期间,Kathryn和许多其他科学研究人员一样,面临预算削减和寻求资助的困难。为了在她需要11个小时的新设备时继续她在资金匮乏的部门继续她的线虫神经元工作,凯瑟琳释放了她的力量“让我们看看我们怎样才能做到更好,更便宜”的心态来破解DIY GFP发光器成为一个更好的,具有研究价值的系统,能够在仅1毫米长的微小蠕虫中可视化神经元。

为什么这对凯瑟琳来说很重要?用她的话说,“如果我没有手动选择每一代最聪明的蠕虫,我的一个菌株就会继续选择GFP。如果没有办法在“解剖”显微镜上看到GFP,我用一把细小的刮刀捡起个体蠕虫,我无法保证他们的所有后代都会发荧光,这是一个问题,当我试图看看是否治疗会损害它们,使它们失去荧光。“

结果:“我们拥有GFP能力的唯一显微镜在移动它们时不适合放大蠕虫,购买合适的'范围将花费数千美元。我的预算还剩下750美元,所以我在LED零件上花了大约80美元并制造了一个照明器。看到细长的细胞不够明亮,所以我花了825美元购买高质量的过滤器,用旧的显微镜目镜作为聚焦镜片,并用管道配件将它安装在我们实验室的微操纵器上。然后我可以选择我最闪亮的蠕虫,提出可靠的有光泽的蠕虫幼虫,并完成我的实验。如果我一直在跟踪GFP中的一个更大的功能,或者我一直在使用红色荧光蛋白,我可能会使用廉价的过滤器并完成整个100美元以下的事情。如果我继续我的实验,我可以在穿过GFP菌株时使用这种发光器,看看哪个后代都有GFP标记。“

凯瑟琳的论文顾问鼓励这种类型的实验,因为他和他自己的论文顾问已经开发了自己的DIY设备来检测小型淡水环节动物的神经传导速度。原型仍挂在他桌子上的公告牌上。他不仅教授动物生理学学生如何非侵入性地进行神经生理学,他和他的研究生也发表了使用这种方法收集数据的论文。他是Backyard Brains Spiker Box的粉丝,并希望看到它在行动。

通过黑客攻击自己的工具,没有花费太多的费用购买平均照明器数千美元(甚至使用过),Kathryn能够完成她的论文。对于需要在细菌或c中观察GFP或RFP(红色荧光蛋白)基因表达的任何DIY科学家来说,该照明器非常有用。线虫。凯瑟琳证明你可以做到一毛钱。

有关基本GFP照明器的详细信息 蠕虫饲养员的公报 在下面(跳跃之后)。要了解有关凯瑟琳改进的更多信息,并查看她关于蠕虫的说明,请查看她的帖子 灿烂的色彩.

[感谢Ian Chin-Sang和Weiwei Zhong]

使用LED作为低成本源来检测GFP和DsRED

Ian Chin-Sang1和Weiwei Zhong加拿大安大略省金斯敦女王大学生物系2,莱斯大学莱斯大学生物化学与细胞生物学系通讯作者:Weiwei Zhong([email protected])

荧光检测组件太昂贵,无法安装在每个立体镜中。通常,我们的荧光标记非常明亮,并且不需要这些设备的全部容量。在这里,我们提出了一种LED设置,成本仅为100美元,可以检测明亮的荧光标记,如myo-2 :: GFP。设置(图1)包括:

  • X-acto帮助手或任何可以定位LED的东西(Amazon.com)
  • 带开关的灯线(本地五金店)
  • 17瓦Xitanium LED驱动器(LED电源)
  • Xitanium驱动器连接器(LED电源)
  • 散热器(LED电源)
  • 点镜头(LED电源)
  • Luxeon V Star光学支架(LED电源)
  • 用于GFP检测的Royal-Blue Luxeon V Star LED(LED电源),或用于dsRED检测的Green Luxeon V Star LED(LED电源)
  • 可选的激发滤光片:Roscolux#4290 CalColor 90蓝色用于GFP,或#389色度绿色用于dsRED(Rosco.com | Edmund Optics)
  • 发射滤波器:用于GFP的Roscolux#12吸管,或用于dsRED的#19 Fire(可用性与激发滤波器相同)

有关如何将此设备实际放在一起的详细信息,请参见此处和此处。

图1. LED设置

图2.使用LED设置检测mIn1动物中的myo-2 :: GFP。

图3.使用LED设置检测myo-2 :: dsRED。

将LED组装到驱动器时​​,确保LED上的+/-端和灯线上的中性线/线端与驱动器上的端相匹配。使用非导电胶如硅胶(Devcon,部件号12045,本地五金店)将镜头支架放在LED上。通过在边缘上施加少量胶水,可以将激发滤光器胶合到镜片上。发射滤光片可以简单地在显微镜物镜下粘贴。

该设置具有较长的使用寿命,无需预热或冷却时间,且无辐射。但是,它只能检测到强信号。我们使用该设置来检测以下标记:myo-2 :: GFP(图2),sur-5 :: GFP,ajm-1 :: GFP和myo-2 :: dsRED(图3)。

使用LED作为低成本源来检测GFP和DsRED


Bio:Eri Gentry是一家生物技术企业家,公民科学社区组织者,也是旧金山湾区第一个生物技术黑客空间BioCurious的联合创始人。

分享

发表评论